ვერცხლის ნიტრატის სახვევების ანტიბიოფილმური ეფექტი და შეხორცების სტიმულირება

გმადლობთ, რომ ეწვიეთ Nature.com-ს. თქვენს მიერ გამოყენებული ბრაუზერის ვერსიას CSS-ის შეზღუდული მხარდაჭერა აქვს. საუკეთესო შედეგის მისაღწევად, გირჩევთ, გამოიყენოთ თქვენი ბრაუზერის უფრო ახალი ვერსია (ან გამორთოთ თავსებადობის რეჟიმი Internet Explorer-ში). ამასობაში, მუდმივი მხარდაჭერის უზრუნველსაყოფად, საიტს სტილის ან JavaScript-ის გარეშე ვაჩვენებთ.
ჭრილობებში მიკრობული ზრდა ხშირად ბიოფილმების სახით ვლინდება, რომლებიც ხელს უშლის შეხორცებას და მათი განადგურება რთულია. ახალი ვერცხლის სახვევები ჭრილობის ინფექციებთან ბრძოლის საშუალებას იძლევა, თუმცა მათი ანტიბიოფილმის ეფექტურობა და ინფექციაზე დამოუკიდებელი შეხორცების ეფექტები ზოგადად უცნობია. Staphylococcus aureus-ისა და Pseudomonas aeruginosa-ს in vitro და in vivo ბიოფილმის მოდელების გამოყენებით, ჩვენ წარმოგიდგენთ Ag1+ იონების წარმომქმნელი სახვევების ეფექტურობას; Ag1+ სახვევები, რომლებიც შეიცავს ეთილენდიამინტეტრაძმარმჟავას და ბენზეთონიუმის ქლორიდს (Ag1+/EDTA/BC) და ვერცხლის ნიტრატის შემცველი სახვევები (Ag ოქსიმარილები), რომლებიც წარმოქმნიან Ag1+, Ag2+ და Ag3+ იონებს ჭრილობის ბიოფილმთან და მის შეხორცებაზე ეფექტთან საბრძოლველად. Ag1+ სახვევებს მინიმალური გავლენა ჰქონდა ჭრილობის ბიოფილმზე in vitro და თაგვებში (C57BL/6j). ამის საპირისპიროდ, ჟანგბადით გაჯერებულმა Ag მარილებმა და Ag1+/EDTA/BC სახვევებმა მნიშვნელოვნად შეამცირეს ბიოფილმებში სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების რაოდენობა in vitro და აჩვენეს ბაქტერიული და EPS კომპონენტების მნიშვნელოვანი შემცირება თაგვის ჭრილობის ბიოფილმებში. ამ სახვევებს განსხვავებული გავლენა ჰქონდა ბიოაპკით ინფიცირებული და არაბიოაპკით ინფიცირებული ჭრილობების შეხორცებაზე, ჟანგბადით გაჯერებულ მარილიან სახვევებს კი უფრო სასარგებლო გავლენა ჰქონდათ რეეპითელიზაციაზე, ჭრილობის ზომასა და ანთებაზე, საკონტროლო მკურნალობასთან და სხვა ვერცხლის სახვევებთან შედარებით. ვერცხლის სახვევების სხვადასხვა ფიზიკურ-ქიმიურ თვისებებს შეიძლება განსხვავებული გავლენა ჰქონდეს ჭრილობის ბიოაპკსა და შეხორცებაზე და ეს გასათვალისწინებელია ბიოაპკით ინფიცირებული ჭრილობების სამკურნალოდ სახვევის შერჩევისას.
ქრონიკული ჭრილობები განისაზღვრება, როგორც „ჭრილობები, რომლებიც ვერ ახერხებენ შეხორცების ნორმალურ ეტაპებს თანმიმდევრულად და დროულად“1. ქრონიკული ჭრილობები პაციენტებისა და ჯანდაცვის სისტემისთვის ფსიქოლოგიურ, სოციალურ და ეკონომიკურ ტვირთს ქმნის. 2017–182 წლებში ჭრილობებისა და მათთან დაკავშირებული თანმხლები დაავადებების მკურნალობაზე NHS-ის წლიური ხარჯები 8.3 მილიარდ ფუნტ სტერლინგს შეადგენს. ქრონიკული ჭრილობები ამჟამად ასევე აქტუალური პრობლემაა შეერთებულ შტატებში, Medicare-ის შეფასებით, ჭრილობებით დაავადებული პაციენტების მკურნალობის წლიური ღირებულება 28.1–96.8 მილიარდ დოლარს შეადგენს3.
ინფექცია ჭრილობების შეხორცების ხელშემშლელი მთავარი ფაქტორია. ინფექციები ხშირად ბიოფილმების სახით ვლინდება, რომლებიც არაშეხორცებადი ქრონიკული ჭრილობების 78%-ში გვხვდება. ბიოფილმები წარმოიქმნება მაშინ, როდესაც მიკროორგანიზმები შეუქცევადად ემაგრებიან ზედაპირებს, როგორიცაა ჭრილობის ზედაპირები, და შეუძლიათ აგრეგაცია მოახდინონ უჯრედგარე პოლიმერის (EPS) წარმომქმნელი საზოგადოებების შესაქმნელად. ჭრილობის ბიოფილმი ასოცირდება ანთებითი პასუხის გაძლიერებასთან, რაც იწვევს ქსოვილების დაზიანებას, რამაც შეიძლება შეაფერხოს ან შეაფერხოს შეხორცება4. ქსოვილების დაზიანების ზრდა შესაძლოა ნაწილობრივ განპირობებული იყოს მატრიქსული მეტალოპროტეინაზების, კოლაგენაზას, ელასტაზას და რეაქტიული ჟანგბადის სახეობების აქტივობის ზრდით5. გარდა ამისა, ანთებითი უჯრედები და ბიოფილმები თავად არიან ჟანგბადის დიდი მომხმარებლები და შესაბამისად, შეუძლიათ გამოიწვიონ ადგილობრივი ქსოვილების ჰიპოქსია, რაც აშორებს უჯრედებს ქსოვილების ეფექტური აღდგენისთვის საჭირო სასიცოცხლო ჟანგბადს6.
მომწიფებული ბიოფილმები ანტიმიკრობული აგენტების მიმართ მაღალი რეზისტენტობით ხასიათდება, რაც ბიოფილმის ინფექციების კონტროლის აგრესიულ სტრატეგიებს მოითხოვს, როგორიცაა მექანიკური დამუშავება, რასაც მოჰყვება ეფექტური ანტიმიკრობული მკურნალობა. რადგან ბიოფილმებს შეუძლიათ სწრაფად რეგენერაცია, ეფექტურ ანტიმიკრობულ საშუალებებს შეუძლიათ ქირურგიული დებრიდაციის შემდეგ რეფორმაციის რისკის შემცირება7.
ვერცხლი სულ უფრო ხშირად გამოიყენება ანტიმიკრობულ სახვევებში და ხშირად გამოიყენება ქრონიკული ინფიცირებული ჭრილობების პირველი რიგის სამკურნალოდ. არსებობს კომერციულად ხელმისაწვდომი ვერცხლის მრავალი სახვევი, რომელთაგან თითოეული შეიცავს ვერცხლის განსხვავებულ შემადგენლობას, კონცენტრაციას და ფუძე მატრიცას. ვერცხლის სამაჯურების განვითარებამ განაპირობა ახალი ვერცხლის სამაჯურების შემუშავება. ვერცხლის მეტალის ფორმა (Ag0) ინერტულია; ანტიმიკრობული ეფექტურობის მისაღწევად, მან უნდა დაკარგოს ელექტრონი იონური ვერცხლის (Ag1+) წარმოსაქმნელად. ტრადიციული ვერცხლის სახვევები შეიცავს ვერცხლის ნაერთებს ან მეტალურ ვერცხლს, რომლებიც სითხესთან შეხებისას იშლება Ag1+ იონების წარმოსაქმნელად. ეს Ag1+ იონები რეაგირებენ ბაქტერიულ უჯრედთან, აშორებენ ელექტრონებს სტრუქტურული კომპონენტებიდან ან გადარჩენისთვის აუცილებელი კრიტიკული პროცესებიდან. დაპატენტებულმა ტექნოლოგიამ განაპირობა ახალი ვერცხლის ნაერთის, Ag ოქსიმარილების (ვერცხლის ნიტრატი, Ag7NO11) შემუშავება, რომელიც შედის ჭრილობის სახვევებში. ტრადიციული ვერცხლისგან განსხვავებით, ჟანგბადის შემცველი მარილების დაშლა წარმოქმნის ვერცხლის უფრო მაღალი ვალენტობის მქონე მდგომარეობებს (Ag1+, Ag2+ და Ag3+). ინ ვიტრო კვლევებმა აჩვენა, რომ ჟანგბადით გაჯერებული ვერცხლის მარილების დაბალი კონცენტრაციები უფრო ეფექტურია, ვიდრე ერთიონიანი ვერცხლი (Ag1+), ისეთი პათოგენური ბაქტერიების წინააღმდეგ, როგორიცაა Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus და Escherichia coli8,9. ვერცხლის სახვევის კიდევ ერთი ახალი ტიპი შეიცავს დამატებით ინგრედიენტებს, კერძოდ, ეთილენდიამინტეტრაძმარმჟავას (EDTA) და ბენზეთონიუმის ქლორიდს (BC), რომლებიც, როგორც ცნობილია, მიზნად ისახავს ბიოფილმის EPS-ს და ამით ზრდის ვერცხლის შეღწევადობას ბიოფილმში. ვერცხლის ეს ახალი ტექნოლოგიები გვთავაზობს ჭრილობის ბიოფილმების დამიზნების ახალ გზებს. თუმცა, ამ ანტიმიკრობული საშუალებების გავლენა ჭრილობის გარემოსა და ინფექციისგან დამოუკიდებელ შეხორცებაზე მნიშვნელოვანია იმის უზრუნველსაყოფად, რომ ისინი არ ქმნიან არახელსაყრელ ჭრილობის გარემოს ან არ აფერხებენ შეხორცებას. ვერცხლის რამდენიმე სახვევთან დაკავშირებით ინ ვიტრო ვერცხლის ციტოტოქსიურობასთან დაკავშირებით შეშფოთება დაფიქსირდა10,11. თუმცა, ინ ვიტრო ციტოტოქსიკურობა ჯერ არ გადაზრდილა ინ ვივო ტოქსიკურობაში და რამდენიმე Ag1+ სახვევმა აჩვენა კარგი უსაფრთხოების პროფილი12.
აქ ჩვენ გამოვიკვლიეთ ვერცხლის ახალი ფორმულირებების შემცველი კარბოქსიმეთილცელულოზის სახვევების ეფექტურობა ჭრილობის ბიოაპკის წინააღმდეგ in vitro და in vivo. გარდა ამისა, შეფასდა ამ სახვევების გავლენა იმუნურ პასუხებსა და ინფექციისგან დამოუკიდებლად შეხორცებაზე.
ყველა გამოყენებული სახვევი კომერციულად ხელმისაწვდომი იყო. 3M Kerracel-ის გელ-ბოჭკოვანი სახვევი (3M, ნატსფორდი, დიდი ბრიტანეთი) არის არაანტიმიკრობული 100%-იანი კარბოქსიმეთილცელულოზის (CMC) გელის ბოჭკოვანი სახვევი, რომელიც ამ კვლევაში საკონტროლო სახვევად იქნა გამოყენებული. შეფასდა სამი ანტიმიკრობული CMC ვერცხლის სახვევი, კერძოდ, 3M Kerracel Ag სახვევი (3M, ნატსფორდი, დიდი ბრიტანეთი), რომელიც შეიცავს 1.7 წონით%-ს ჟანგბადიან ვერცხლის მარილს (Ag7NO11) მაღალი ვალენტობის ვერცხლის იონებში (Ag1+, Ag2+ და Ag3+). Ag7NO11-ის დაშლის დროს წარმოიქმნება Ag1+, Ag2+ და Ag3+ იონები 1:2:4 თანაფარდობით. Aquacel Ag Extra სახვევი, რომელიც შეიცავს 1.2% ვერცხლის ქლორიდს (Ag1+) (ConvaTec, დისაიდი, დიდი ბრიტანეთი) 13 და Aquacel Ag + Extra სახვევი, რომელიც შეიცავს 1.2% ვერცხლის ქლორიდს (Ag1+), EDTA-ს და ბენზეთონიუმის ქლორიდს (ConvaTec, დისაიდი, დიდი ბრიტანეთი) 14.
კვლევაში გამოყენებული შტამები იყო Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (ინგლისის საზოგადოებრივი ჯანდაცვა, სოლსბერი) და Staphylococcus aureus NCTC 6571 (ინგლისის საზოგადოებრივი ჯანდაცვა, სოლსბერი).
ბაქტერიები მთელი ღამით გაიზარდა მიულერ-ჰინტონის ბულიონში (Oxoid, Altrincham, დიდი ბრიტანეთი). შემდეგ მთელი ღამის განმავლობაში მიღებული კულტურა განზავდა მიულერ-ჰინტონის ბულიონში 1:100 თანაფარდობით და 200 µl მოათავსეს სტერილურ 0.2 µm Whatman-ის ციკლოპორულ მემბრანებზე (Whatman plc, Maidstone, დიდი ბრიტანეთი) მიულერ-ჰინტონის აგარის ფირფიტებზე (Sigma-Aldrich Company Ltd, კენტი, დიდი ბრიტანეთი). კოლონიური ბიოაპკის ფორმირება 37°C ტემპერატურაზე 24 საათის განმავლობაში. ეს კოლონიური ბიოაპკები შემოწმდა ლოგარითმული შეკუმშვაზე.
სახვევი დაჭერით 3 სმ2 კვადრატულ ნაჭრებად და წინასწარ დაასველეთ სტერილური დეიონიზებული წყლით. სახვევი დააფარეთ კოლონიის ბიოაპკს აგარის ფირფიტაზე. ბიოაპკის ყოველ 24 ჰექტარზე მოაცილეს და ბიოაპკში არსებული სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიები (CFU/მლ) განისაზღვრა Day-Angle ნეიტრალიზაციის ბულიონში (Merck-Millipore) სერიული განზავებით (10−1-დან 10−7-მდე). 37°C-ზე 24 საათიანი ინკუბაციის შემდეგ, მიულერ-ჰინტონის აგარის ფირფიტებზე ჩატარდა სტანდარტული ფირფიტების დათვლა. თითოეული დამუშავება და დროის წერტილი ჩატარდა სამჯერ და ფირფიტების დათვლა განმეორდა თითოეული განზავებისთვის.
ღორის მუცლის კანი მიიღება დიდი თეთრი ჯიშის მდედრი ღორებისგან დაკვლიდან 15 წუთის განმავლობაში, ევროკავშირის ექსპორტის სტანდარტების შესაბამისად. კანი გაიპარსა და გაიწმინდა სპირტიანი ხელსახოცებით, შემდეგ კი გაიყინა -80°C ტემპერატურაზე 24 საათის განმავლობაში კანის დევიტალიზაციისთვის. გალღობის შემდეგ, 1 სმ2 კანის ნაჭრები სამჯერ გაირეცხა PBS-ით, 0.6%-იანი ნატრიუმის ჰიპოქლორიტით და 70%-იანი ეთანოლით 20 წუთის განმავლობაში ყოველ ჯერზე. ეპიდერმისის მოცილებამდე, დარჩენილი ეთანოლის მოსაშორებლად, 3-ჯერ გაირეცხა სტერილურ PBS-ში. კანი კულტივირებული იქნა 6-ჭაბურღილიან ფირფიტაზე, ზემოდან 0.45 მკმ სისქის ნეილონის მემბრანით (Merck-Millipore) და 3 შთამნთქმელი საფენით (Merck-Millipore), რომელიც შეიცავდა 3 მლ ნაყოფის ძროხის შრატს (Sigma), რომელიც შეიცავდა 10%-იან Dulbecco-ს მოდიფიცირებულ Eagle გარემოს (Dulbecco's Modified Eagle Medium – Aldrich Ltd.).
კოლონიური ბიოფილმები გაიზარდა ბიოფილმის ექსპოზიციის კვლევებისთვის აღწერილი მეთოდით. ​​ბიოფილმის მემბრანაზე 72 საათის განმავლობაში კულტივირების შემდეგ, ბიოფილმი დაიტანეს კანის ზედაპირზე სტერილური ინოკულაციის მარყუჟის გამოყენებით და მემბრანა მოიხსნა. შემდეგ ბიოფილმი ინკუბირებული იქნა ღორის დერმაზე დამატებით 24 საათის განმავლობაში 37°C ტემპერატურაზე, რათა ბიოფილმი მომწიფებულიყო და მიეკრა ღორის კანს. ბიოფილმის მომწიფებისა და მიმაგრების შემდეგ, 1.5 სმ2 ზომის წინასწარ დასველებული სახვევი, რომელიც წინასწარ დასველებული იყო სტერილური გამოხდილი წყლით, პირდაპირ კანის ზედაპირზე დაიტანეს და ინკუბირებული იყო 37°C ტემპერატურაზე 24 საათის განმავლობაში. სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიები ვიზუალიზებული იქნა შეღებვით PrestoBlue უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობის რეაგენტის (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, დიდი ბრიტანეთი) ერთგვაროვანი წასმით თითოეული ექსპლანტის აპიკალურ ზედაპირზე და 5 წუთის განმავლობაში ინკუბაციით. გამოიყენეთ Leica DFC425 ციფრული კამერა Leica MZ8 მიკროსკოპზე სურათების მყისიერად გადასაღებად. ვარდისფრად შეფერილი უბნები რაოდენობრივად განისაზღვრა Image Pro პროგრამული უზრუნველყოფის 10 ვერსიის გამოყენებით (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (mediacy.com)). სკანირებადი ელექტრონული მიკროსკოპია ჩატარდა ქვემოთ აღწერილი მეთოდით.
ღამით გაზრდილი ბაქტერიები განზავდა მიულერ-ჰინტონის ბულიონში 1:100 თანაფარდობით. კულტურის 200 μl დაემატა სტერილურ 0.2 μm უოტმენის ციკლოპორულ მემბრანას (უოტმენი, მეიდსტოუნი, დიდი ბრიტანეთი) და დაითესა მიულერ-ჰინტონის აგარზე. ბიოაპკის ფირფიტები ინკუბირებული იქნა 37°C ტემპერატურაზე 72 საათის განმავლობაში, რათა უზრუნველყოფილიყო მომწიფებული ბიოაპკის ფორმირება.
ბიოაპკის მომწიფებიდან 3 დღის შემდეგ, 3 სმ2 კვადრატული სახვევი პირდაპირ ბიოაპკზე მოათავსეს და 24 საათის განმავლობაში 37°C ტემპერატურაზე ინკუბაცია მოახდინეს. ბიოაპკის ზედაპირიდან სახვევის მოხსნის შემდეგ, თითოეული ბიოაპკის ზედაპირზე 20 წამის განმავლობაში დაემატა 1 მლ PrestoBlue Cell Viability Reagent (Invitrogen, Waltham, MA). ზედაპირები გაშრეს, სანამ ფერის ცვლილებები ჩაიწერებოდა Nikon D2300 ციფრული კამერით (Nikon UK Ltd., Kingston, UK).
მოამზადეთ ღამის კულტურები მიულერ-ჰინტონის აგარზე, გადაიტანეთ ცალკეული კოლონიები 10 მლ მიულერ-ჰინტონის ბულიონში და ინკუბაცია მოახდინეთ შეიკერზე 37°C (100 ბრ/წთ) ტემპერატურაზე. ღამის ინკუბაციის შემდეგ, კულტურა განზავდა მიულერ-ჰინტონის ბულიონში 1:100 თანაფარდობით და 300 µლ დაასხეს 0.2 µm წრიულ უოტმანის ციკლოპოროვან მემბრანაზე (Whatman International, Maidstone, დიდი ბრიტანეთი) მიულერ-ჰინტონის აგარზე და ინკუბაცია მოახდინეს 37°C ტემპერატურაზე 72 საათის განმავლობაში. . მომწიფებული ბიოაპკი დაიტანეს ჭრილობაზე ქვემოთ აღწერილი წესით.
ცხოველებთან დაკავშირებული ყველა სამუშაო ჩატარდა მანჩესტერის უნივერსიტეტში ცხოველთა კეთილდღეობისა და ეთიკური მიმოხილვის ოფისის (P8721BD27) მიერ დამტკიცებული პროექტის ლიცენზიით და შინაგან საქმეთა სამინისტროს მიერ 2012 წლის გადასინჯული ASPA-ს ფარგლებში გამოქვეყნებული სახელმძღვანელო პრინციპების შესაბამისად. ყველა ავტორმა დაიცვა ჩამოსვლის სახელმძღვანელო პრინციპები. ყველა in vivo კვლევისთვის გამოყენებული იქნა რვა კვირის C57BL/6j თაგვები (Envigo, Oxon, დიდი ბრიტანეთი). თაგვებს ანესთეზია ჩაუტარდათ იზოფლურანით (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, დიდი ბრიტანეთი) და მათი ზურგის ზედაპირები გაპარსეს და გაიწმინდეს. შემდეგ თითოეულ თაგვს ჩაუტარდა 2 × 6 მმ ამოკვეთილი ჭრილობა Stiefel-ის ბიოფსიის პუნჩის გამოყენებით (Schuco International, ჰერტფორდშირი, დიდი ბრიტანეთი). ბიოაპკით ინფიცირებული ჭრილობების შემთხვევაში, დაზიანებისთანავე, ჭრილობის დერმალურ ფენაზე დააფინეთ ზემოთ აღწერილი წესით მემბრანაზე გაზრდილი 72-საათიანი კოლონიური ბიოაპკი სტერილური ინოკულაციის მარყუჟის გამოყენებით და გადააგდეთ მემბრანა. ჭრილობის ტენიანი გარემოს შესანარჩუნებლად, სახვევის ერთი კვადრატული სანტიმეტრი წინასწარ სველდება სტერილური წყლით. სახვევები პირდაპირ თითოეულ ჭრილობაზე დაადეს და დაიფარეს 3M Tegaderm-ის აპკით (3M, ბრეკნელი, დიდი ბრიტანეთი) და Mastisol-ის თხევადი წებოვანი ნივთიერებით (Eloquest Healthcare, ფერნდეილი, მიჩიგანი) დამატებითი ადჰეზიის უზრუნველსაყოფად კიდეებზე. ტკივილგამაყუჩებლად, თაგვებს 0.1 მგ/კგ კონცენტრაციით შესთავაზეს ბუპრენორფინი (Animalcare, იორკი, დიდი ბრიტანეთი). დაზიანებიდან სამი დღის შემდეგ, თაგვები დახოცეს პირველი გრაფიკის მეთოდით და საჭიროებისამებრ ამოიღეს, განახევრეს და შეინახონ ჭრილობის არე.
ჰემატოქსილინით (ThermoFisher Scientific) და ეოზინით (ThermoFisher Scientific) შეღებვა ჩატარდა მწარმოებლის პროტოკოლის შესაბამისად. ჭრილობის ფართობი და რეეპითელიზაცია განისაზღვრა Image Pro პროგრამული უზრუნველყოფის 10 ვერსიის (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD) გამოყენებით.
ქსოვილის ნაჭრები გაიწმინდა ქსილენში (ThermoFisher Scientific, ლაფბორო, დიდი ბრიტანეთი), რეჰიდრატირებული იქნა 100–50%-იანი დახარისხებული ეთანოლით და დროებით ჩაეფლო დეიონიზებულ წყალში (ThermoFisher Scientific). იმუნოჰისტოქიმია ჩატარდა VectaStain Elite ABC PK-6104 ნაკრების (Vector Laboratories, ბერლინგეიმი, კალიფორნია) გამოყენებით მწარმოებლის პროტოკოლის შესაბამისად. ნეიტროფილების NIMP-R14 (Thermofisher Scientific) და მაკროფაგების Ms CD107b Pure M3/84 (BD Biosciences, ვოკინგემი, დიდი ბრიტანეთი) მიმართ პირველადი ანტისხეულები განზავდა 1:100 პროპორციით ბლოკირების ხსნარში და დაემატა გაჭრილ ზედაპირზე, შემდეგ კი დაემატა 2 ანტისხეული Anti-, VectaStain ABC და Vector Nova Red Peroxidase (HRP) სუბსტრატის ნაკრები (Vector Laboratories, ბერლინგეიმი, კალიფორნია) და შეღებილი იქნა ჰემატოქსილინით. სურათები მიღებული იქნა Olympus BX43 მიკროსკოპისა და Olympus DP73 ციფრული კამერის გამოყენებით (Olympus, საუთენდი-ონ-სი, დიდი ბრიტანეთი).
კანის ნიმუშები ფიქსირდა 2.5%-იან გლუტარალდეჰიდსა და 4%-იან ფორმალდეჰიდში 0.1 M HEPES-ში (pH 7.4) 24 საათის განმავლობაში 4°C ტემპერატურაზე. ნიმუშები გაუწყლოდათ ხარისხიანი ეთანოლის გამოყენებით და გააშრეს CO2-ში Quorum K850 კრიტიკული წერტილის საშრობის გამოყენებით (Quorum Technologies Ltd, ლოტონი, დიდი ბრიტანეთი) და დაიფარა ოქრო-პალადიუმის შენადნობით Quorum SC7620 მინი გაფრქვევის/ნათების გამონადენის სისტემის გამოყენებით. ნიმუშების გამოსახულება გადაღებულია FEI Quanta 250 სკანირებადი ელექტრონული მიკროსკოპის (ThermoFisher Scientific) გამოყენებით ჭრილობის ცენტრალური წერტილის ვიზუალიზაციისთვის.
თაგვის ამოკვეთილ ჭრილობის ზედაპირზე წაისვეს Toto-1 იოდიდი (2 μM) და ინკუბირებული იქნა 5 წუთის განმავლობაში 37°C ტემპერატურაზე (ThermoFisher Scientific) და დამუშავდა Syto-60-ით (10 μM) 37°C ტემპერატურაზე (ThermoFisher Scientific). 15-წუთიანი Z-stack გამოსახულებები შეიქმნა Leica TCS SP8-ის გამოყენებით.
ბიოლოგიური და ტექნიკური განმეორებითი მონაცემები ცხრილში შეიყვანეს და გაანალიზდა Graphpad Prism V9 პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით (GraphPad Software, La Jolla, CA). თითოეულ მკურნალობასა და არაანტიმიკრობულ საკონტროლო სახვევს შორის განსხვავებების შესამოწმებლად გამოყენებული იქნა ვარიაციის ცალმხრივი ანალიზი მრავალჯერადი შედარებებით დანეტის პოსტ ჰოკ ტესტის გამოყენებით. p მნიშვნელობა <0.05 მნიშვნელოვნად ჩაითვალა.
ვერცხლის გელის ბოჭკოვანი სახვევების ეფექტურობა თავდაპირველად შეფასდა Staphylococcus aureus-ისა და Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოაპკის კოლონიების მიმართ in vitro. ვერცხლის სახვევები შეიცავს ვერცხლის სხვადასხვა ფორმულებს: ტრადიციული ვერცხლის სახვევები წარმოქმნიან Ag1+ იონებს; ვერცხლის სახვევებს, რომლებსაც შეუძლიათ Ag1+ იონების წარმოქმნა EDTA/BC-ის დამატების შემდეგ, შეუძლიათ ბიოაპკის მატრიცა გაანადგურონ და ბაქტერიები ვერცხლის იონების15 ანტიბაქტერიული ეფექტის ქვეშ დააზიანონ და ჟანგბადით გაჯერებული Ag მარილების შემცველი სახვევები, რომლებიც წარმოქმნიან Ag1+, Ag2+ და Ag3+ იონებს. მისი ეფექტურობა შედარებული იქნა გელისებრი ბოჭკოებისგან დამზადებულ არაანტიმიკრობულ საკონტროლო სახვევთან. ბიოაპკში დარჩენილი სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიები შეფასდა ყოველ 24 საათში 8 დღის განმავლობაში (სურათი 1). მე-5 დღეს, ბიოაპკში ხელახლა იქნა შეტანილი 3.85 × 105S. Staphylococcus aureus ან 1.22×105P. aeruginosa ბიოაპკის აღდგენის შესაფასებლად. არაანტიმიკრობულ საკონტროლო სახვევებთან შედარებით, Ag1+ სახვევებს მინიმალური გავლენა ჰქონდათ Staphylococcus aureus-ისა და Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოფილმებში ბაქტერიების სიცოცხლისუნარიანობაზე 5 დღის განმავლობაში. ამის საპირისპიროდ, ჟანგბადით გაჯერებული Ag-სა და Ag1+ + EDTA/BC მარილების შემცველი სახვევები ეფექტური იყო ბიოფილმში არსებული ბაქტერიების განადგურებაში 5 დღის განმავლობაში. მე-5 დღეს პლანქტონური ბაქტერიებით განმეორებითი ინოკულაციის შემდეგ, ბიოფილმის აღდგენა არ დაფიქსირებულა (სურ. 1).
ვერცხლის სახვევებით დამუშავების შემდეგ Staphylococcus aureus-ისა და Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოფილმებში სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების რაოდენობრივი განსაზღვრა. Staphylococcus aureus-ისა და Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოფილმის კოლონიები დამუშავდა ვერცხლის სახვევებით ან არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევებით, ხოლო დარჩენილი სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების რაოდენობა განისაზღვრა ყოველ 24 საათში. 5 დღის შემდეგ, ბიოფილმი ხელახლა იქნა ინოკულირებული 3.85×105S. Staphylococcus aureus-ით ან 1.22×105P-ით. ბაქტერიოპლანქტონის Pseudomonas aeruginosa-ს კოლონიები ინდივიდუალურად ჩამოყალიბდა ბიოფილმის აღდგენის შესაფასებლად. გრაფიკები აჩვენებს საშუალო +/- სტანდარტულ შეცდომას.
ვერცხლის სახვევების ბიოაპლიკაციის სიცოცხლისუნარიანობაზე ზემოქმედების ვიზუალიზაციის მიზნით, სახვევები დაიტანეს ღორის კანზე ექს ვივო გაზრდილ მომწიფებულ ბიოაპლიკებზე. 24 საათის შემდეგ, სახვევი მოიხსნა და ბიოაპლიკაცია შეღებეს ლურჯი რეაქტიული საღებავით, რომელიც მეტაბოლიზდება ცოცხალი ბაქტერიების მიერ ვარდისფერ ფერამდე. საკონტროლო სახვევებით დამუშავებული ბიოაპლიკები ვარდისფერი იყო, რაც მიუთითებს ბიოაპლიკში სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების არსებობაზე (სურათი 2A). ამის საპირისპიროდ, Ag ოქსიზოლების სახვევით დამუშავებული ბიოაპლიკაცია ძირითადად ლურჯი იყო, რაც მიუთითებს, რომ ღორის კანის ზედაპირზე დარჩენილი ბაქტერიები არაცოცხალი ბაქტერიები იყო (სურათი 2B). Ag1+ შემცველი სახვევებით დამუშავებულ ბიოაპლიკებში დაფიქსირდა შერეული ლურჯი და ვარდისფერი შეფერილობა, რაც მიუთითებს ბიოაპლიკში სიცოცხლისუნარიანი და არაცოცხალი ბაქტერიების არსებობაზე (სურათი 2C), მაშინ როდესაც Ag1+ შემცველი EDTA/BC სახვევები უპირატესად ლურჯი იყო რამდენიმე ვარდისფერი ლაქით, რაც მიუთითებს ვერცხლის სახვევით დაზარალებულ ადგილებზე (სურათი 2D). აქტიური (ვარდისფერი) და არააქტიური (ლურჯი) უბნების რაოდენობრივმა განსაზღვრამ აჩვენა, რომ საკონტროლო ლაქა 75%-ით აქტიური იყო (სურათი 2E). Ag1+ + EDTA/BC სახვევების გამოყენება ჟანგბადიანი Ag მარილის სახვევების მსგავსად შესრულდა, გადარჩენის მაჩვენებლებმა შესაბამისად 13% და 14% შეადგინა. Ag1+ სახვევმა ასევე შეამცირა ბაქტერიების სიცოცხლისუნარიანობა 21%-ით. ეს ბიოფილმები შემდეგ დაკვირვებული იქნა სკანირების ელექტრონული მიკროსკოპიის (SEM) გამოყენებით. საკონტროლო სახვევით და Ag1+ სახვევით დამუშავების შემდეგ, ღორის კანს ფარავდა Pseudomonas aeruginosa-ს ფენა (სურათი 2F,H), ხოლო Ag1+ სახვევით დამუშავების შემდეგ, ბაქტერიული უჯრედები მცირე რაოდენობით აღმოჩნდა და მათ ქვეშაც მცირე რაოდენობით ბაქტერიული უჯრედები აღმოჩნდა. კოლაგენის ბოჭკოები შეიძლება ჩაითვალოს ღორის კანის ქსოვილურ სტრუქტურად (სურათი 2G). Ag1+ + EDTA/BC სახვევით დამუშავების შემდეგ, ბაქტერიული ფოლაქები და კოლაგენური ბოჭკოების ქვეშ არსებული ფოლაქები ხილული იყო (სურათი 2I).
ვერცხლის სახვევით დამუშავების შემდეგ Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოაპკის ვიზუალიზაცია. (A–D) ღორის კანზე გაზრდილი Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოაპკებში ბაქტერიული სიცოცხლისუნარიანობა ვიზუალიზებული იქნა PrestoBlue სიცოცხლისუნარიანობის საღებავის გამოყენებით ვერცხლის სახვევებით ან არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევებით დამუშავებიდან 24 საათის შემდეგ. ცოცხალი ბაქტერიები ვარდისფერია, არასიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიები და ღორის კანი ლურჯი. (E) Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოაპკების რაოდენობრივი განსაზღვრა ღორის კანზე (ვარდისფერი ლაქა) სკანირების ელექტრონული მიკროსკოპიის Image Pro ვერსია 10 (FI) გამოყენებით და დამუშავებული ვერცხლის სახვევით ან არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევით 24 საათის განმავლობაში. SEM შკალის ზოლი = 5 µm. (J–M) კოლონიური ბიოაპკები გაიზარდა ფილტრებზე და შეღებილი იქნა PrestoBlue რეაქტიული საღებავით ვერცხლის სახვევებით 24 საათიანი ინკუბაციის შემდეგ.
იმის დასადგენად, მოქმედებდა თუ არა სახვევებსა და ბიოფილმებს შორის მჭიდრო კონტაქტი სახვევების ეფექტურობაზე, ბრტყელ ზედაპირზე განთავსებული კოლონიური ბიოფილმები დამუშავდა სახვევებით 24 საათის განმავლობაში და შემდეგ შეიღება რეაქტიული საღებავებით. დაუმუშავებელი ბიოფილმი მუქი ვარდისფერი ფერის იყო (სურათი 2J). ჟანგბადით გაჯერებული Ag მარილების შემცველი სახვევებით დამუშავებული ბიოფილმებისგან განსხვავებით (სურათი 2K), Ag1+ ან Ag1+ + EDTA/BC შემცველი სახვევებით დამუშავებულ ბიოფილმებს ვარდისფერი შეფერილობის ზოლები აღენიშნებოდათ (სურათი 2L,M). ეს ვარდისფერი შეფერილობა მიუთითებს სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების არსებობაზე და დაკავშირებულია სახვევში ნაკერების არესთან. ეს შეკერილი ადგილები ქმნის მკვდარ სივრცეებს, რომლებიც ბიოფილმში არსებულ ბაქტერიებს გადარჩენის საშუალებას აძლევს.
ვერცხლის სახვევების ეფექტურობის შესაფასებლად in vivo, მომწიფებული S. aureus-ით და P. aeruginosa-თი ინფიცირებული თაგვების სრული სისქის ამოკვეთილი ჭრილობები დამუშავდა არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევებით ან ვერცხლის სახვევებით. მკურნალობიდან 3 დღის შემდეგ, მაკროსკოპული გამოსახულების ანალიზმა აჩვენა ჭრილობების უფრო მცირე ზომები, როდესაც ისინი ჟანგბადით გაჯერებული მარილის სახვევებით მკურნალობდნენ არაანტიმიკრობულ საკონტროლო სახვევებთან და სხვა ვერცხლის სახვევებთან შედარებით (სურათი 3A-H). ამ დაკვირვებების დასადასტურებლად, ჭრილობები ამოღებულ იქნა და ჭრილობის ფართობი და რეეპითელიზაცია განისაზღვრა ჰემატოქსილინით და ეოზინით შეღებილ ქსოვილის მონაკვეთებზე image pro პროგრამული უზრუნველყოფის 10 ვერსიის გამოყენებით (სურათი 3I-L).
ვერცხლის სახვევების გავლენა ჭრილობის ზედაპირზე და ბიოფილმებით ინფიცირებული ჭრილობების რეეპითელიზაცია. (A–H) Pseudomonas aeruginosa-ს (A–D) და Staphylococcus aureus-ის (E–H) ბიოფილმებით ინფიცირებული მცირე უჯრედები არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევით, ჟანგბადით გაჯერებული Ag მარილის სახვევით, Ag1+ სახვევით და Ag1+ სახვევით სამდღიანი მკურნალობის შემდეგ. წარმომადგენლობითი მაკროსკოპული გამოსახულებები. თაგვების ჭრილობები Ag1+ + EDTA/BC სახვევით. (IL) Pseudomonas aeruginosa-ს წარმომადგენლობითი ინფექცია, ჰისტოლოგიური კვეთები შეღებილი ჰემატოქსილინით და ეოზინით, გამოყენებული ჭრილობის ფართობისა და ეპითელური რეგენერაციის რაოდენობრივი განსაზღვრისთვის. Pseudomonas aeruginosa-ს (M, N) და Staphylococcus aureus-ის (O, P) ბიოფილმებით ინფიცირებული ჭრილობების ჭრილობის ფართობის (M, O) და რეეპითელიზაციის პროცენტული მაჩვენებლის (N, P) რაოდენობრივი განსაზღვრა (მკურნალობის ჯგუფის n = 12 მიხედვით). გრაფიკები აჩვენებს საშუალო +/- სტანდარტულ შეცდომას. * ნიშნავს p = < 0.05 ** ნიშნავს p = < 0.01; მაკროსკოპული მასშტაბი = 2.5 მმ, ჰისტოლოგიური მასშტაბი = 500 µმ.
Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოაპკით ინფიცირებულ ჭრილობებში ჭრილობის ფართობის რაოდენობრივმა განსაზღვრამ (სურათი 3M) აჩვენა, რომ Ag ოქსიმარილებით დამუშავებულ ჭრილობებს საშუალოდ 2.5 მმ2 ჭრილობის ზომა ჰქონდა, ხოლო არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევის საშუალო ზომა 3.1 მმ2, რაც სიმართლეს არ შეესაბამება. მიაღწია სტატისტიკურად მნიშვნელოვანს (სურათი 3M). p = 0.423). Ag1+ ან Ag1+ + EDTA/BC-ით დამუშავებულ ჭრილობებს ჭრილობის ფართობის შემცირება არ აღენიშნებოდათ (შესაბამისად, 3.1 მმ2 და 3.6 მმ2). ჟანგბადით გამდიდრებული Ag მარილის სახვევით მკურნალობამ უფრო მეტად შეუწყო ხელი რეეპითელიზაციას, ვიდრე არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევმა (შესაბამისად, 34% და 15%; p = 0.029) და Ag1+ ან Ag1+ + EDTA/BC-მ (10% და 11%) (სურათი 3N). . , შესაბამისად).
ჭრილობის ფართობისა და ეპითელიუმის რეგენერაციის მსგავსი ტენდენციები დაფიქსირდა S. aureus ბიოაპკით ინფიცირებულ ჭრილობებში (სურათი 3O). ჟანგბადიანი ვერცხლის მარილების შემცველმა სახვევებმა ჭრილობის ფართობი (2.0 მმ2) 23%-ით შეამცირა არაანტიმიკრობული სახვევის საკონტროლო ჯგუფთან (2.6 მმ2), თუმცა ეს შემცირება მნიშვნელოვანი არ იყო (p = 0.304) (სურათი 3O). გარდა ამისა, Ag1+ სამკურნალო ჯგუფში ჭრილობის ფართობი ოდნავ შემცირდა (2.4 მმ2), მაშინ როდესაც Ag1+ + EDTA/BC სახვევით დამუშავებულმა ჭრილობამ ჭრილობის ფართობი არ შეამცირა (2.9 მმ2). Ag-ის ჟანგბადის მარილებმა ასევე ხელი შეუწყვეს S. aureus ბიოაპკით ინფიცირებული ჭრილობების რეეპითელიზაციას (31%) უფრო მეტად, ვიდრე არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევებით დამუშავებულმა ჭრილობებმა (12%, p = 0.003) (სურათი 3P). Ag1+ სახვევმა (16%, p = 0.903) და Ag+1 + EDTA/BC სახვევმა (14%, p = 0.965) ეპითელური რეგენერაციის დონე კონტროლის ჯგუფთან მსგავსი აჩვენა.
ვერცხლის სახვევების ბიოფილმის მატრიცაზე ზემოქმედების ვიზუალიზაციისთვის ჩატარდა Toto 1 და Syto 60 იოდიდით შეღებვა (სურ. 4). Toto 1 იოდიდი არის უჯრედგარე ნუკლეინის მჟავების ზუსტი ვიზუალიზაციისთვის, რომლებიც უხვადაა ბიოფილმების EPS-ში. Syto 60 არის უჯრედგარე გამტარი საღებავი, რომელიც გამოიყენება კონტრშეღებვის სახით16. Pseudomonas aeruginosa-ს (სურათი 4A-D) და Staphylococcus aureus-ის (სურათი 4I-L) ბიოფილმებით ინოკულირებულ ჭრილობებში Toto 1-ისა და Syto 60 იოდიდის დაკვირვებებმა აჩვენა, რომ სახვევით დამუშავებიდან 3 დღის შემდეგ, ბიოფილმში EPS-ის შემცველობა მნიშვნელოვნად შემცირდა, რომელიც შეიცავდა ჟანგბადიან მარილებს Ag და Ag1+ + EDTA/BC. Ag1+ სახვევებმა დამატებითი ანტიბიოფილმის კომპონენტების გარეშე მნიშვნელოვნად შეამცირა უჯრედგარე დნმ Pseudomonas aeruginosa-თი ინოკულირებულ ჭრილობებში, მაგრამ ნაკლებად ეფექტური იყო Staphylococcus aureus-ით ინოკულირებულ ჭრილობებში.
ჭრილობის ბიოაპკის in vivo ვიზუალიზაცია საკონტროლო ან ვერცხლის სახვევებით 3-დღიანი მკურნალობის შემდეგ. Pseudomonas aeruginosa-ს (A–D) და Staphylococcus aureus-ის (I–L) კონფოკალური გამოსახულებები, შეღებილი Toto 1-ით (მწვანე) უჯრედგარე ნუკლეინის მჟავების, უჯრედგარე ბიოაპკის პოლიმერების კომპონენტის ვიზუალიზაციისთვის. უჯრედშიდა ნუკლეინის მჟავების შესაღებად გამოიყენეთ Syto 60 (წითელი). მჟავები. P. Pseudomonas aeruginosa-ს (E–H) და Staphylococcus aureus-ის (M–P) ბიოაპკებით ინფიცირებული ჭრილობების სკანირებადი ელექტრონული მიკროსკოპია საკონტროლო და ვერცხლის სახვევებით 3-დღიანი მკურნალობის შემდეგ. SEM მასშტაბის ზოლი = 5 µm. კონფოკალური ვიზუალიზაციის მასშტაბის ზოლი = 50 µm.
სკანირების ელექტრონულმა მიკროსკოპიამ აჩვენა, რომ Pseudomonas aeruginosa-ს (სურათი 4E-H) და Staphylococcus aureus-ის (სურათი 4M-P) ბიოფილმის კოლონიებით ინოკულირებულ თაგვებს ჭრილობებში მნიშვნელოვნად ნაკლები ბაქტერია ჰქონდათ ვერცხლის სახვევებით 3-დღიანი მკურნალობის შემდეგ.
ბიოფილმით ინფიცირებულ თაგვებში ვერცხლის სახვევების ჭრილობის ანთებაზე ზემოქმედების შესაფასებლად, ბიოფილმით ინფიცირებული ჭრილობების 3 დღის განმავლობაში საკონტროლო ან ვერცხლის სახვევებით დამუშავებული მონაკვეთები იმუნოჰისტოქიმიურად შეიღება ნეიტროფილებისა და მაკროფაგებისთვის სპეციფიკური ანტისხეულების გამოყენებით. ნეიტროფილებისა და მაკროფაგების შინაგანი რაოდენობრივი განსაზღვრა. გრანულაციური ქსოვილი. სურათი 5). ყველა ვერცხლის სახვევმა შეამცირა ნეიტროფილების და მაკროფაგების რაოდენობა Pseudomonas aeruginosa-თი ინფიცირებულ ჭრილობებში, არაანტიმიკრობულ საკონტროლო სახვევებთან შედარებით, მკურნალობის სამი დღის შემდეგ. თუმცა, ჟანგბადით გაჯერებული ვერცხლის მარილის სახვევით მკურნალობამ გამოიწვია ნეიტროფილების (p = <0.0001) და მაკროფაგების (p = <0.0001) უფრო მეტად შემცირება სხვა ვერცხლის სახვევებთან შედარებით (სურათი 5I,J). მიუხედავად იმისა, რომ Ag1+ + EDTA/BC-ს უფრო დიდი გავლენა ჰქონდა ჭრილობის ბიოფილმზე, მან შეამცირა ნეიტროფილების და მაკროფაგების დონე Ag1+ სახვევთან შედარებით ნაკლებად. S. aureus ბიოფილმით ინფიცირებული საშუალო სიმძიმის ჭრილობები ასევე დაფიქსირდა Ag (p = <0.0001), Ag1+ (p = 0.0008) და Ag1++ EDTA/BC (p = 0.0043) ოქსიზოლებით დამუშავების შემდეგ საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით. მსგავსი ტენდენციები შეინიშნება ნეიტროპენიის შემთხვევაშიც (სურ. 5K). თუმცა, მხოლოდ ჟანგბადით გამდიდრებულმა Ag მარილის სახვევმა აჩვენა მაკროფაგების რაოდენობის მნიშვნელოვანი შემცირება გრანულაციურ ქსოვილში საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით S. aureus ბიოფილმებით ინფიცირებულ ჭრილობებში (p = 0.0339) (სურათი 5L).
ნეიტროფილები და მაკროფაგები განისაზღვრა Pseudomonas aeruginosa-სა და Staphylococcus aureus-ის ბიოფილმებით ინფიცირებულ ჭრილობებში, არაანტიმიკრობული კონტროლით ან ვერცხლის სახვევებით 3-დღიანი მკურნალობის შემდეგ. ნეიტროფილები (AD) და მაკროფაგები (EH) განისაზღვრა ქსოვილის მონაკვეთებში, რომლებიც შეღებილი იყო ნეიტროფილების ან მაკროფაგების სპეციფიკური ანტისხეულებით. ნეიტროფილების (I და K) და მაკროფაგების (J და L) რაოდენობრივი განსაზღვრა Pseudomonas aeruginosa-ს (I და J) და Staphylococcus aureus-ის (K & L) ბიოფილმებით ინფიცირებულ ჭრილობებში. N = 12 ჯგუფზე. გრაფიკები აჩვენებს საშუალო +/- სტანდარტულ შეცდომას, მნიშვნელობის მნიშვნელობებს არაანტიბაქტერიულ კონტროლირებად სახვევთან შედარებით, * ნიშნავს p = < 0.05, ** ნიშნავს p = < 0.01; *** ნიშნავს p = < 0.001; მიუთითებს p = <0.0001).
შემდეგ შევაფასეთ ვერცხლის სახვევების გავლენა ინფექციაზე დამოუკიდებელ შეხორცებაზე. არაინფიცირებული ამოკვეთილი ჭრილობები დამუშავდა არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევით ან ვერცხლის სახვევით 3 დღის განმავლობაში (სურათი 6). გამოცდილი ვერცხლის სახვევებიდან მხოლოდ ჟანგბადით გაჯერებული მარილის სახვევით დამუშავებული ჭრილობები ჩანდა უფრო პატარა მაკროსკოპულ სურათებზე, ვიდრე საკონტროლო ჯგუფით დამუშავებული ჭრილობები (სურათი 6A-D). ჭრილობის ფართობის რაოდენობრივმა განსაზღვრამ ჰისტოლოგიური ანალიზის გამოყენებით აჩვენა, რომ Ag ოქსიზოლის სახვევით დამუშავების შემდეგ ჭრილობის საშუალო ფართობი იყო 2.35 მმ2, საკონტროლო ჯგუფით დამუშავებული ჭრილობების 2.96 მმ2-თან შედარებით, მაგრამ ამ განსხვავებას სტატისტიკურად მნიშვნელოვანი მნიშვნელობა არ მიუღწევია (p = 0.488) (სურ. 6I). ამის საპირისპიროდ, Ag1+ (3.38 მმ2, p = 0.757) ან Ag1+ + EDTA/BC (4.18 მმ2, p = 0.054) სახვევებით დამუშავების შემდეგ ჭრილობის ფართობის შემცირება არ დაფიქსირებულა საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით. Ag ოქსიზოლის სახვევის გამოყენებისას საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით ეპითელური რეგენერაციის ზრდა დაფიქსირდა (შესაბამისად, 30% 22%-ის წინააღმდეგ), თუმცა ამან მნიშვნელოვანი მნიშვნელობა არ მიიღო (p = 0.067), რაც საკმაოდ მნიშვნელოვანია და ადასტურებს წინა შედეგებს. ოქსიზოლებით სახვევი ხელს უწყობს რეეპითელიზაციას. - არაინფიცირებული ჭრილობების ეპითელიზაცია17. ამის საპირისპიროდ, Ag1+ ან Ag1+ + EDTA/BC სახვევებით მკურნალობას არანაირი ეფექტი არ მოუხდენია ან აჩვენა რეეპითელიზაციის შემცირება საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით.
ვერცხლის ჭრილობის სახვევის გავლენა ჭრილობის შეხორცებაზე არაინფიცირებულ თაგვებში სრული რეზექციით. (AD) ჭრილობების წარმომადგენლობითი მაკროსკოპული გამოსახულებები არაანტიმიკრობული საკონტროლო სახვევით და ვერცხლის სახვევით სამდღიანი მკურნალობის შემდეგ. (EH) ჰემატოქსილინით და ეოზინით შეღებილი ჭრილობის წარმომადგენლობითი მონაკვეთები. ჭრილობის ფართობის (I) და რეეპითელიზაციის პროცენტის (J) რაოდენობრივი განსაზღვრა გამოითვალა ჭრილობის შუა წერტილში არსებული ჰისტოლოგიური მონაკვეთებიდან გამოსახულების ანალიზის პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით (n = 11–12 თითო სამკურნალო ჯგუფზე). გრაფიკები აჩვენებს საშუალო +/- სტანდარტულ შეცდომას. * საშუალო p = <0.05.
ვერცხლს ჭრილობების შეხორცებისას ანტიმიკრობული თერაპიის სახით გამოყენების ხანგრძლივი ისტორია აქვს, თუმცა, მრავალმა განსხვავებულმა ფორმულამ და მიწოდების მეთოდმა შეიძლება გამოიწვიოს ანტიმიკრობული ეფექტურობის განსხვავებები 18. გარდა ამისა, ვერცხლის მიწოდების სპეციფიკური სისტემების ანტიბიოფილმის თვისებები ბოლომდე შესწავლილი არ არის. მიუხედავად იმისა, რომ მასპინძლის იმუნური პასუხი შედარებით ეფექტურია პლანქტონური ბაქტერიების წინააღმდეგ, ის ზოგადად ნაკლებად ეფექტურია ბიოფილმების წინააღმდეგ 19. პლანქტონური ბაქტერიები ადვილად ფაგოციტოზირდება მაკროფაგების მიერ, მაგრამ ბიოფილმებში აგრეგირებული უჯრედები დამატებით პრობლემებს ქმნის, რადგან ზღუდავს მასპინძლის პასუხს იმდენად, რამდენადაც იმუნურ უჯრედებს შეუძლიათ აპოპტოზის გავლა და პროანთებითი ფაქტორების გამოყოფა იმუნური პასუხის გასაძლიერებლად 20. დაფიქსირდა, რომ ზოგიერთ ლეიკოციტს შეუძლია ბიოფილმებში შეღწევა 21, მაგრამ არ შეუძლიათ ბაქტერიების ფაგოციტოზი, როგორც კი ეს დაცვა დაირღვება 22. ჭრილობის ბიოფილმის ინფექციის წინააღმდეგ მასპინძლის იმუნური პასუხის მხარდასაჭერად უნდა იქნას გამოყენებული ჰოლისტური მიდგომა. ჭრილობის დებრიდმენტაციამ შეიძლება ფიზიკურად დაარღვიოს ბიოფილმი და მოაშოროს ბიოდატვირთვის უმეტესი ნაწილი, მაგრამ მასპინძლის იმუნური პასუხი შეიძლება არაეფექტური იყოს დარჩენილი ბიოფილმის წინააღმდეგ, განსაკუთრებით თუ მასპინძლის იმუნური პასუხი დაირღვა. ამგვარად, ანტიმიკრობული თერაპიები, როგორიცაა ვერცხლის სახვევები, ხელს უწყობს მასპინძლის იმუნური პასუხის გაძლიერებას და ბიოაპკის ინფექციების აღმოფხვრას. შემადგენლობას, კონცენტრაციას, ხსნადობას და მიწოდების სუბსტრატს შეუძლია გავლენა მოახდინოს ვერცხლის ანტიმიკრობულ ეფექტურობაზე. ბოლო წლებში ვერცხლის დამუშავების ტექნოლოგიის განვითარებამ ეს სახვევები უფრო ეფექტური გახადა9,23. ვერცხლის სახვევების ტექნოლოგიის განვითარებასთან ერთად, მნიშვნელოვანია გავიგოთ ამ სახვევების ეფექტურობა ჭრილობის ინფექციის კონტროლში და, რაც მთავარია, ვერცხლის ამ ძლიერი ფორმების გავლენა ჭრილობის გარემოსა და შეხორცებაზე.
ამ კვლევაში, ჩვენ შევადარეთ ორი მოწინავე ვერცხლის სახვევის ეფექტურობა ჩვეულებრივ ვერცხლის სახვევებთან, რომლებიც წარმოქმნიან Ag1+ იონებს ბიოფილმების საწინააღმდეგოდ, სხვადასხვა in vitro და in vivo მოდელების გამოყენებით. ჩვენ ასევე შევაფასეთ ამ სახვევების გავლენა ჭრილობის გარემოსა და ინფექციისგან დამოუკიდებელ შეხორცებაზე. მიწოდების მატრიცის გავლენის მინიმიზაციის მიზნით, ყველა გამოცდილი ვერცხლის სახვევი შედგებოდა კარბოქსიმეთილცელულოზისგან.
Pseudomonas aeruginosa-სა და Staphylococcus aureus-ის კოლონიური ბიოფილმების წინააღმდეგ ამ ვერცხლის სახვევების ჩვენი წინასწარი შეფასება აჩვენებს, რომ ტრადიციული Ag1+ სახვევებისგან განსხვავებით, ორი მოწინავე ვერცხლის სახვევი, Ag1+ + EDTA/BC და ჟანგბადით გაჯერებული Ag მარილები, ეფექტურია 5-ზე. ისინი ეფექტურად კლავენ ბიოფილმის ბაქტერიებს რამდენიმე დღეში. გარდა ამისა, ეს სახვევები ხელს უშლიან ბიოფილმის ხელახლა წარმოქმნას პლანქტონურ ბაქტერიებთან განმეორებითი კონტაქტის დროს. Ag1+ სახვევი შეიცავდა ვერცხლის ქლორიდს, იგივე ვერცხლის ნაერთს და ფუძე მატრიცას, რასაც Ag1+ + EDTA/BC და იმავე პერიოდში შეზღუდული გავლენა ჰქონდა ბაქტერიების სიცოცხლისუნარიანობაზე ბიოფილმში. დაკვირვება, რომ Ag1+ + EDTA/BC სახვევი უფრო ეფექტური იყო ბიოფილმის წინააღმდეგ, ვიდრე Ag1+ სახვევი, რომელიც შედგებოდა იგივე მატრიცისა და ვერცხლის ნაერთისგან, ადასტურებს იმ აზრს, რომ ბიოფილმის წინააღმდეგ ვერცხლის ქლორიდის ეფექტურობის გასაზრდელად საჭიროა დამატებითი ინგრედიენტები, როგორც ეს სხვაგანაც არის აღწერილი15. ეს შედეგები ადასტურებს იმ აზრს, რომ BC და EDTA დამატებით როლს თამაშობენ სახვევის საერთო ეფექტურობაში და რომ ამ კომპონენტის არარსებობამ Ag1+ სახვევებში შესაძლოა ხელი შეუწყო in vitro ეფექტურობის დემონსტრირების წარუმატებლობას. ჩვენ აღმოვაჩინეთ, რომ Ag2+ და Ag3+ იონების წარმომქმნელი ჟანგბადიანი Ag მარილის სახვევები უფრო ძლიერი ანტიბაქტერიული ეფექტურობით გამოირჩეოდა, ვიდრე Ag1+ და Ag1+ + EDTA/BC-ის მსგავს დონეზე. თუმცა, მაღალი რედოქს პოტენციალის გამო, გაურკვეველია, რამდენ ხანს რჩებიან Ag3+ იონები აქტიური და ეფექტური ჭრილობის ბიოფილმების წინააღმდეგ და შესაბამისად, საჭიროებს შემდგომ შესწავლას. გარდა ამისა, არსებობს მრავალი განსხვავებული სახვევი, რომელიც წარმოქმნის Ag1+ იონებს და რომლებიც ამ კვლევაში არ იქნა გამოცდილი. ეს სახვევები შედგება სხვადასხვა ვერცხლის ნაერთებისგან, კონცენტრაციებისა და ფუძე მატრიცებისგან, რამაც შეიძლება გავლენა მოახდინოს Ag1+ იონების მიწოდებაზე და მათ ეფექტურობაზე ბიოფილმების წინააღმდეგ. ასევე აღსანიშნავია, რომ არსებობს მრავალი განსხვავებული in vitro და in vivo მოდელი, რომელიც გამოიყენება ჭრილობის სახვევების ბიოფილმების წინააღმდეგ ეფექტურობის შესაფასებლად. გამოყენებული მოდელის ტიპი, ასევე ამ მოდელებში გამოყენებული გარემოს მარილისა და ცილის შემცველობა გავლენას მოახდენს სახვევის ეფექტურობაზე. ჩვენს in vivo მოდელში, ჩვენ ბიოაპკს in vitro მომწიფების საშუალება მივეცით და შემდეგ ჭრილობის კანის ზედაპირზე გადავიტანეთ. მასპინძელი თაგვის იმუნური პასუხი შედარებით ეფექტურია ჭრილობაზე დატანილი პლანქტონური ბაქტერიების წინააღმდეგ, რითაც ჭრილობის შეხორცებისას ბიოაპკი წარმოიქმნება. ჭრილობაზე მომწიფებული ბიოაპკის დამატება ზღუდავს მასპინძელი იმუნური პასუხის ეფექტურობას ბიოაპკის ფორმირებაზე, რადგან საშუალებას აძლევს მომწიფებულ ბიოაპკს, ჭრილობაში დამკვიდრდეს შეხორცების დაწყებამდე. ამრიგად, ჩვენი მოდელი საშუალებას გვაძლევს შევაფასოთ ანტიმიკრობული სახვევების ეფექტურობა მომწიფებულ ბიოაპკებზე ჭრილობების შეხორცების დაწყებამდე.
ჩვენ ასევე აღმოვაჩინეთ, რომ სახვევის მორგება გავლენას ახდენდა ვერცხლის სახვევების ეფექტურობაზე in vitro გაზრდილ ბიოფილმებსა და ღორის კანზე. ჭრილობასთან მჭიდრო კონტაქტი კრიტიკულად ითვლება სახვევის ანტიმიკრობული ეფექტურობისთვის24,25. ჟანგბადით გაჯერებული Ag მარილების შემცველი სახვევები მჭიდრო კონტაქტში იყო მომწიფებულ ბიოფილმებთან, რაც 24 საათის შემდეგ ბიოფილმში სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების რაოდენობის მნიშვნელოვან შემცირებას იწვევდა. ამის საპირისპიროდ, Ag1+ და Ag1+ + EDTA/BC სახვევებით დამუშავებისას, სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების მნიშვნელოვანი რაოდენობა რჩებოდა. ეს სახვევები სახვევის მთელ სიგრძეზე ნაკერებს შეიცავს, რაც ქმნის მკვდარ სივრცეებს, რომლებიც ხელს უშლის ბიოფილმთან მჭიდრო კონტაქტს. ჩვენს in vitro კვლევებში, ამ არაკონტაქტურმა უბნებმა ხელი შეუშალა ბიოფილმში სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების განადგურებას. ბაქტერიების სიცოცხლისუნარიანობა შევაფასეთ მხოლოდ 24 საათის დამუშავების შემდეგ; დროთა განმავლობაში, სახვევის გაჯერებისას, შესაძლოა ნაკლები მკვდარი სივრცე იყოს, რაც ამცირებს ამ სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიებისთვის განკუთვნილ ფართობს. თუმცა, ეს ხაზს უსვამს სახვევის შემადგენლობის მნიშვნელობას და არა მხოლოდ სახვევში ვერცხლის ტიპს.
მიუხედავად იმისა, რომ in vitro კვლევები სასარგებლოა სხვადასხვა ვერცხლის ტექნოლოგიების ეფექტურობის შესადარებლად, ასევე მნიშვნელოვანია გავიგოთ ამ სახვევების გავლენა ბიოფილმებზე in vivo, სადაც მასპინძელი ქსოვილი და იმუნური პასუხები ხელს უწყობს სახვევების ეფექტურობას ბიოფილმების წინააღმდეგ. ამ სახვევების გავლენა ჭრილობის ბიოფილმებზე დაფიქსირდა სკანირების ელექტრონული მიკროსკოპიის და ბიოფილმის EPS შეღებვის გამოყენებით უჯრედშიდა და უჯრედგარე დნმ საღებავების გამოყენებით. ჩვენ აღმოვაჩინეთ, რომ 3 დღიანი მკურნალობის შემდეგ, ყველა სახვევი ეფექტური იყო უჯრედგარე დნმ-ის შემცირებაში ბიოფილმით ინფიცირებულ ჭრილობებში, მაგრამ Ag1+ სახვევი ნაკლებად ეფექტური იყო Staphylococcus aureus-ით ინფიცირებულ ჭრილობებში. სკანირების ელექტრონულმა მიკროსკოპიამ ასევე აჩვენა, რომ ვერცხლის სახვევებით დამუშავებულ ჭრილობებში მნიშვნელოვნად ნაკლები ბაქტერია იყო წარმოდგენილი, თუმცა ეს უფრო გამოხატული იყო ჟანგბადით გაჯერებული Ag მარილის სახვევის და Ag1+ + EDTA/BC სახვევის შემთხვევაში Ag1+ სახვევთან შედარებით. ეს მონაცემები აჩვენებს, რომ გამოცდილ ვერცხლის სახვევებს განსხვავებული ხარისხის გავლენა ჰქონდათ ბიოფილმის სტრუქტურაზე, მაგრამ ვერცხლის სახვევებიდან ვერცერთმა ვერ შეძლო ბიოფილმის განადგურება, რაც ადასტურებს ჭრილობის ბიოფილმის ინფექციების მკურნალობისადმი ჰოლისტური მიდგომის საჭიროებას; ვერცხლის სამაჯურების გამოყენება. მკურნალობას წინ უძღვის ფიზიკური დებრიდინგი ბიოაპკის უმეტესი ნაწილის მოსაშორებლად.
ქრონიკული ჭრილობები ხშირად მძიმე ანთების მდგომარეობაშია, რის გამოც ჭრილობის ქსოვილში ანთებითი უჯრედების ჭარბი რაოდენობა დიდი ხნის განმავლობაში რჩება, რაც იწვევს ქსოვილების დაზიანებას და ამცირებს ჟანგბადის მარაგს, რომელიც საჭიროა ჭრილობაში ეფექტური უჯრედული მეტაბოლიზმისა და ფუნქციონირებისთვის26. ბიოფირები ამწვავებს ჭრილობის ამ არახელსაყრელ გარემოს სხვადასხვა გზით შეხორცებაზე უარყოფითი გავლენის მოხდენით, მათ შორის უჯრედების პროლიფერაციისა და მიგრაციის ინჰიბირებით და პროანთებითი ციტოკინების აქტივაციით27. რადგან ვერცხლის სახვევები უფრო ეფექტური ხდება, მნიშვნელოვანია გვესმოდეს, თუ რა გავლენას ახდენს ისინი ჭრილობის გარემოსა და შეხორცებაზე.
საინტერესოა, რომ მიუხედავად იმისა, რომ ყველა ვერცხლის სახვევმა გავლენა მოახდინა ბიოაპკის შემადგენლობაზე, მხოლოდ ჟანგბადით გაჯერებული ვერცხლის მარილის სახვევებმა გაზარდა ამ ინფიცირებული ჭრილობების რეეპითელიზაცია. ეს მონაცემები ადასტურებს ჩვენს წინა დასკვნებს17 და კალანის და სხვების (2017)28 დასკვნებს, რომლებმაც აჩვენეს ჟანგბადით გაჯერებული ვერცხლის მარილების კარგი უსაფრთხოებისა და ტოქსიკურობის პროფილები, რადგან ვერცხლის უფრო დაბალი კონცენტრაციები ეფექტური იყო ბიოაპკების წინააღმდეგ.
ჩვენი ამჟამინდელი კვლევა ხაზს უსვამს ვერცხლის ტექნოლოგიაში არსებულ განსხვავებებს ანტიმიკრობულ ვერცხლის სახვევებს შორის და ამ ტექნოლოგიის გავლენას ჭრილობის გარემოსა და ინფექციისგან დამოუკიდებელ შეხორცებაზე. თუმცა, ეს შედეგები განსხვავდება წინა კვლევებისგან, რომლებიც აჩვენებს, რომ Ag1+ + EDTA/BC სახვევმა გააუმჯობესა დაზიანებული კურდღლის ყურების შეხორცების პარამეტრები in vivo. თუმცა, ეს შეიძლება გამოწვეული იყოს ცხოველთა მოდელების, გაზომვის დროისა და ბაქტერიული გამოყენების მეთოდების განსხვავებებით29. ამ შემთხვევაში, ჭრილობის გაზომვები ჩატარდა დაზიანებიდან 12 დღის შემდეგ, რათა სახვევის აქტიურ ინგრედიენტებს საშუალება მიეცათ, ბიოფილმზე უფრო ხანგრძლივი პერიოდის განმავლობაში ემოქმედათ. ამას ადასტურებს კვლევა, რომელმაც აჩვენა, რომ კლინიკურად ინფიცირებული ფეხის წყლულები, რომლებიც დამუშავებული იყო Ag1+ + EDTA/BC-ით, თავდაპირველად ზომაში გაიზარდა მკურნალობის ერთი კვირის შემდეგ, შემდეგ კი Ag1+ + EDTA/BC-ით მკურნალობის მომდევნო 3 კვირის განმავლობაში და არაანტიმიკრობული პრეპარატების გამოყენებიდან 4 კვირის განმავლობაში. CMC სახვევები წყლულების ზომის შესამცირებლად30.
ვერცხლის გარკვეული ფორმები და კონცენტრაციები ადრე ციტოტოქსიური იყო in vitro 11, მაგრამ ეს in vitro შედეგები ყოველთვის არ აისახება უარყოფით ეფექტებზე in vivo. გარდა ამისა, ვერცხლის ტექნოლოგიის განვითარებამ და სახვევებში ვერცხლის ნაერთებისა და კონცენტრაციების უკეთ გაგებამ განაპირობა მრავალი უსაფრთხო და ეფექტური ვერცხლის სახვევის შემუშავება. თუმცა, ვერცხლის სახვევების ტექნოლოგიის განვითარებასთან ერთად, მნიშვნელოვანია გავიგოთ ამ სახვევების გავლენა ჭრილობის გარემოზე31,32,33. ადრე იყო ცნობილი, რომ რეეპითელიზაციის გაზრდილი სიჩქარე შეესაბამება ანთების საწინააღმდეგო M2 მაკროფაგების გაზრდილ პროპორციას პროანთებით M1 ფენოტიპთან შედარებით. ეს აღინიშნა წინა თაგვის მოდელში, სადაც ვერცხლის ჰიდროგელის ჭრილობის სახვევები შედარებული იყო ვერცხლის სულფადიაზინთან და არაანტიმიკრობულ ჰიდროგელებთან34.
ქრონიკულ ჭრილობებს შეიძლება აღენიშნებოდეს ჭარბი ანთება და დაფიქსირდა, რომ ნეიტროფილების ჭარბი რაოდენობა შეიძლება საზიანო იყოს ჭრილობების შეხორცებისთვის35. ნეიტროფილებით შემცირებულ თაგვებზე ჩატარებულ კვლევაში, ნეიტროფილების არსებობამ შეაფერხა რეეპითელიზაცია. ნეიტროფილების ჭარბი რაოდენობა იწვევს პროტეაზების და რეაქტიული ჟანგბადის სახეობების, როგორიცაა სუპეროქსიდი და წყალბადის ზეჟანგი, მაღალ დონეს, რომლებიც დაკავშირებულია ქრონიკულ და ნელა შეხორცებად ჭრილობებთან37,38. ანალოგიურად, მაკროფაგების რაოდენობის უკონტროლო ზრდამ შეიძლება გამოიწვიოს ჭრილობების შეხორცების შეფერხება39. ეს ზრდა განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია, თუ მაკროფაგები ვერ ახერხებენ პროანთებითი ფენოტიპიდან პრო-შეხორცებად ფენოტიპზე გადასვლას, რაც იწვევს ჭრილობების შეხორცების ანთებითი ფაზის დატოვებას40. ჩვენ დავაკვირდით ნეიტროფილების და მაკროფაგების შემცირებას ბიოაპკით ინფიცირებულ ჭრილობებში ვერცხლის სახვევებით 3-დღიანი მკურნალობის შემდეგ, მაგრამ შემცირება უფრო გამოხატული იყო ჟანგბადით გაჯერებული მარილის სახვევებით. ეს შემცირება შესაძლოა იყოს ვერცხლზე იმუნური პასუხის პირდაპირი შედეგი, ბიოდატვირთვის შემცირებაზე რეაქცია, ან ჭრილობის შეხორცების გვიან სტადიაზე ყოფნა და შესაბამისად, ჭრილობაში იმუნური უჯრედების შემცირება. ჭრილობაში ანთებითი უჯრედების რაოდენობის შემცირებამ შესაძლოა შეინარჩუნოს ჭრილობის შეხორცებისთვის ხელსაყრელი გარემო. Ag ოქსიმარილების ინფექციისგან დამოუკიდებელ შეხორცებას ხელის შეწყობის მექანიზმი გაურკვეველია, მაგრამ Ag ოქსიმარილების უნარი, გამოიმუშაონ ჟანგბადი და გაანადგურონ ანთების მედიატორის, წყალბადის ზეჟანგის მავნე დონეები, შესაძლოა ახსნას ეს და საჭიროებს შემდგომ შესწავლას17.
ქრონიკული, შეუხორცებელი ინფიცირებული ჭრილობები პრობლემას წარმოადგენს როგორც ექიმებისთვის, ასევე პაციენტებისთვის. მიუხედავად იმისა, რომ ბევრი სახვევი ანტიმიკრობული ეფექტურობის შესახებ ამტკიცებს, კვლევა იშვიათად ამახვილებს ყურადღებას ჭრილობის მიკროგარემოზე მოქმედ სხვა ძირითად ფაქტორებზე. ეს კვლევა აჩვენებს, რომ ვერცხლის სხვადასხვა ტექნოლოგიას განსხვავებული ანტიმიკრობული ეფექტურობა და, რაც მთავარია, განსხვავებული გავლენა აქვს ჭრილობის გარემოსა და შეხორცებაზე, ინფექციისგან დამოუკიდებლად. მიუხედავად იმისა, რომ ეს in vitro და in vivo კვლევები აჩვენებს ამ სახვევების ეფექტურობას ჭრილობის ინფექციების მკურნალობასა და შეხორცების ხელშეწყობაში, კლინიკაში ამ სახვევების ეფექტურობის შესაფასებლად საჭიროა რანდომიზებული კონტროლირებადი კვლევები.
მიმდინარე კვლევის დროს გამოყენებული და/ან გაანალიზებული მონაცემთა ნაკრებები ხელმისაწვდომია შესაბამისი ავტორისგან გონივრული მოთხოვნის შემთხვევაში.